什么是免疫组化sp法?

免疫组化SP法是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。即链霉菌抗生物素蛋白~过氧化物酶连结法。采用生物素标记的第二抗体与链霉菌抗生物素蛋白链接的碱性磷酸酶及底物色素混合液来测定细胞或组织中的抗原。免疫组化SP大约可形成一百万个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所形成的复合物。因此大量的酶将保证免疫组化SP法具有超高的灵敏度，以及高敏感性，低背景和操作简便的优点。

免疫组化sp法作步骤是什么?

1. 切片常规脱蜡至水。如需抗原修复，可在此步后进行

2.缓冲液洗 3min/2 次。

3. 为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色，将切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分钟。

4. 缓冲液洗 5min/2 次。

5.滴加Ultra V Block ， 在室温下孵育 5 分钟以封闭非特异性的背景染色。

(注：孵育不要超过 10 分钟，否则会导致特异性染色降低。如果一抗的稀释液中含有 5 - 10% 正常羊血清，这一步可以省略。)

6. 缓冲液洗 5min/2 次。

7. 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 - 2 小时。(具体孵育时间和温度由试验者最终决定)

8. 缓冲液洗 5min/2 次。

9 . 滴加 Primary Antibody Enhancer(增强子)，在室温下孵育 20 分钟。

10 .缓冲液洗 5min/2 次。

11 .滴加HRPPolymer(酶标二抗) ，在室温下孵育 30 分钟。(注：HRP Polymer 对光敏感，应避免不必要的光暴露并储存在不透明的小瓶中。)

12 .缓冲液洗 5min/2 次。

13 .向 1ml DAB Plus Substrate (或 AEC Plus Substrate)中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen (或 AEC Plus Chromogen)，混匀后滴加到切片上，孵育 3 - 15 分钟。(具体时间由染色深浅决定。)

14 .自来水充分冲洗，复染，脱水，透明，封片。

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